Estandarización de un ELISA para la cuantificación de anticuerpos IgG contra vesículas de membrana externa de Salmonella Paratyphi A / Standardization of an ELISA for the quantification of IgG antibodies against outer membrane vesicle of Salmonella Paratyphi A

Salmonella Paratyphi A es un patógeno exclusivo de humanos, siendo la segunda causa más común de fiebre entérica en el sudeste asiático. Recientemente la incidencia en este continente ha aumentado, desplazando a Salmonella entérica serotipo Typhi como la primera causa de fiebre entérica. En la actualidad no existen vacunas licenciadas contra S. Paratyphi A. El Instituto Finlay de Vacunas se encuentra trabajando en la obtención de un candidato vacunal basado en vesículas de membrana externa (VME) contra S. Paratyphi A, por lo que se hizo necesario contar con una técnica para la evaluación de su inmunogenicidad. El objetivo de este trabajo fue la estandarización de un ELISA para la cuantificación de anticuerpos IgG contra VME de S. Paratyphi A. Para ello, se determinaron las mejores condiciones de este ensayo en cuanto a concentración óptima de recubrimiento y dilución de trabajo del conjugado. Además, se definió el intervalo y linealidad de la curva, la precisión intra e interensayo, la especificidad y el límite de detección. La curva de calibración se generó con un suero estándar interno y presentó un buen ajuste lineal con un R² =0.98. Los coeficientes de variación en los ensayos de precisión intra e interensayo estuvieron en los intervalos establecidos para cada uno (=10 por ciento, =20 por ciento respectivamente). Los resultados obtenidos avalan el empleo de este ELISA cuantitativo para la evaluación de la inmunogenicidad de formulaciones de VME de S. Paratyphi A en fases de investigación y desarrollo(AU)

Salmonella Paratyphi A, is an exclusive pathogen of humans, being the second most common cause of enteric fever in Southeast Asia. Recently the incidence of this disease in this continent has increased, displacing Salmonella enterica serotype Typhi as the first cause of enteric fever. Currently there are no vaccines licensed against S. Paratyphi A. The Finlay Institute of Vaccines is working on obtaining a vaccine candidate based on outer membrane vesicles (VME) against S. Paratyphi A, so it became necessary to develop a technique for the evaluation of its immunogenicity. The objective of this work was the standardization of an ELISA for the quantification of IgG antibodies against VME of S. Paratyphi A. The best conditions of this assay were determined in terms of optimum concentration of coating and working dilution of the conjugate. In addition, the interval and linearity of the curve, the intra- and inter-assay precision, the specificity and the limit of detection were defined. The calibration curve was generated with an internal standard serum and presented a good linear fit with an R² =0.98. The coefficients of variation in the intra- and interassay precision tests were in the intervals established for each one (=10 percent, =20 percent respectively). The results obtained support the use of this quantitative ELISA for the evaluation of the immunogenicity of VME formulations of S. Paratyphi A in research and development phases(AU)

Estandarización de un ELISA para la cuantificación de anticuerpos IgG contra vesículas de membrana externa de Salmonella Paratyphi A / Standardization of an ELISA for the quantification of IgG antibodies against outer membrane vesicle of Salmonella Paratyphi A

Salmonella Paratyphi A es un patógeno exclusivo de humanos, siendo la segunda causa más común de fiebre entérica en el sudeste asiático. Recientemente la incidencia en este continente ha aumentado, desplazando a Salmonella entérica serotipo Typhi como la primera causa de fiebre entérica. En la actualidad no existen vacunas licenciadas contra S. Paratyphi A. El Instituto Finlay de Vacunas se encuentra trabajando en la obtención de un candidato vacunal basado en vesículas de membrana externa (VME) contra S. Paratyphi A, por lo que se hizo necesario contar con una técnica para la evaluación de su inmunogenicidad. El objetivo de este trabajo fue la estandarización de un ELISA para la cuantificación de anticuerpos IgG contra VME de S. Paratyphi A. Para ello, se determinaron las mejores condiciones de este ensayo en cuanto a concentración óptima de recubrimiento y dilución de trabajo del conjugado. Además, se definió el intervalo y linealidad de la curva, la precisión intra e interensayo, la especificidad y el límite de detección. La curva de calibración se generó con un suero estándar interno y presentó un buen ajuste lineal con un R2 =0.98. Los coeficientes de variación en los ensayos de precisión intra e interensayo estuvieron en los intervalos establecidos para cada uno (=10 por ciento, =20 por ciento respectivamente). Los resultados obtenidos avalan el empleo de este ELISA cuantitativo para la evaluación de la inmunogenicidad de formulaciones de VME de S. Paratyphi A en fases de investigación y desarrollo(AU)

Salmonella Paratyphi A, is an exclusive pathogen of humans, being the second most common cause of enteric fever in Southeast Asia. Recently the incidence of this disease in this continent has increased, displacing Salmonella enterica serotype Typhi as the first cause of enteric fever. Currently there are no vaccines licensed against S. Paratyphi A. The Finlay Institute of Vaccines is working on obtaining a vaccine candidate based on outer membrane vesicles (VME) against S. Paratyphi A, so it became necessary to develop a technique for the evaluation of its immunogenicity. The objective of this work was the standardization of an ELISA for the quantification of IgG antibodies against VME of S. Paratyphi A. The best conditions of this assay were determined in terms of optimum concentration of coating and working dilution of the conjugate. In addition, the interval and linearity of the curve, the intra- and inter-assay precision, the specificity and the limit of detection were defined. The calibration curve was generated with an internal standard serum and presented a good linear fit with an R2 =0.98. The coefficients of variation in the intra- and interassay precision tests were in the intervals established for each one (=10 percent, =20 percent respectively). The results obtained support the use of this quantitative ELISA for the evaluation of the immunogenicity of VME formulations of S. Paratyphi A in research and development phases(AU)

Determinación rápida de la identidad del polisacárido de Salmonella Typhi y toxoide diftérico en vacunas conjugadas / Rapid determination of the identity of Salmonella Typhi polysaccharide and diphtheria toxoid in conjugate vaccines

El polisacárido Vi (PsVi) de Salmonella Typhi es un antígeno T-independiente y ha demostrado ser protector en adultos jóvenes. Sin embargo, para aumentar la respuesta de anticuerpos y conferir propiedades T-dependientes al polisacárido, se ha conjugado a proteínas. Dentro de los controles exigidos por los organismos regulatorios para estas vacunas está la identidad antigénica de sus componentes y para eso se recomiendan el uso de técnicas de Resonancia Magnética Nuclear o técnicas serológicas. El objetivo del presente trabajo, fue establecer las condiciones óptimas de trabajo de un Dot Blot que permitiera determinar, rápidamente, la identidad de los antígenos en vacunas conjugadas contra S. Typhi. Para ello, se estudiaron los tiempos de incubación, las concentraciones óptimas de anticuerpo monoclonal (AcM) y del ingrediente farmacéutico activo (IFA), así como los volúmenes de aplicación óptimos para las IFAs y formulaciones vacunales, tanto para el PsVi como para el toxoide diftérico (TD). Los resultados mostraron que para la determinación de la identidad antigénica fueron suficientes 5 µL de muestras de los conjugados monovalentes en una dilución de 1/10 (vol/vol) e igual volumen para las formulaciones vacunales. Quedó demostrado que la concentración de 2,5 µg/mL para el AcM contra el PsVi y a 2 µg/mL para el AcM contra TD fueron suficientes para la determinación; mientras que los tiempos de incubación fueron ajustados a 15 min con incubación a 37 ºC. Como conclusión del trabajo se puede decir que quedaron establecidas las condiciones óptimas de trabajo para la determinación rápida de la identidad antigénica del PsVi y del TD presentes en IFA y formulaciones vacunales conjugadas(AU)

Vi polysaccharide from Salmonella Typhi is a T-independent antigen that has proven to be protective in young adults. However, it has been conjugated to proteins in order to confer T-dependent properties to the polysaccharide, and improving the antibody response. The regulatory agencies require knowing the identity of antigens included in vaccines. The Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy and serological techniques are recommended. The aim of this work was to establish the optimal working conditions of a Dot Blot that would allow to determine quickly the identity of the antigens in conjugate vaccines against S. Typhi. The incubation times, optimum concentrations of monoclonal antibodies (MAb) and active pharmaceutical ingredient (API), as well as optimum application volumes for APIs and vaccine formulations were studied for both, PsVi and diphtheria toxoid (DT). It was proven that 5 µL of samples of the monovalent conjugates were sufficient at a dilution of 1/10 (vol/vol) and an equal volume for the vaccine formulations. It was demonstrated that the concentration of 2.5 µg/mL for the MAb against PsVi and 2 µg/mL for the MAb against DT were suitable. The incubation times were adjusted to 15 min with incubation at 37 ºC. It was established a simple and rapid method for the specific identification of PsVi and DT present in API and conjugate vaccines(AU)

Dot Blot para determinar la identidad antigénica en vacunas conjugadas contra Streptococcus pneumoniae serotipo 19F / Dot Blot to determine the antigenic identity in conjugated vaccines against Streptococcus pneumoniae serotype 19F

Las autoridades regulatorias recomiendan el uso de técnicas de Resonancia Magnética Nuclear o técnicas serológicas para la determinación de la identidad de los antígenos presentes en las vacunas conjugadas. Con la aparición de las vacunas conjugadas multivalentes, se ha hecho necesario recurrir a técnicas inmunoquímicas con la utilización de anticuerpos monoclonales para aumentar la sensibilidad en la determinación de la identidad de los antígenos en dichas vacunas conjugadas. El objetivo del presente trabajo fue establecer las condiciones óptimas de trabajo que permitieran utilizar la técnica del Dot Blot para determinar la identidad de los antígenos en vacunas conjugadas de Streptococcus pneumoniae serotipo 19F. Para ello se estudiaron los tiempos de incubación, la influencia del reactivo en la solución de bloqueo; también las concentraciones óptimas del anticuerpo monoclonal y de los ingredientes farmacéuticos activos, así como los volúmenes de aplicación óptimos para estos y vacunas. Se utilizó un anticuerpo monoclonal contra el polisacárido capsular del serotipo 19F de neumococo. Las muestras empleadas en este trabajo fueron lotes de ingredientes farmacéuticos activos de conjugados de polisacárido capsular 19F y lotes de un candidato vacunal cubano conjugado heptavalente contra neumococos. Los resultados mostraron que para la determinación de la identidad antigénica fueron suficientes 10 µL de muestras de los principios activos a una concentración de 125 µg/mL e igual volumen para las vacunas heptavalentes. Quedó demostrado que una concentración de 1 µg/mL para el anticuerpo monoclonal y tiempos de incubación de 30 min a 37 °C fueron suficientes para la determinación. Estos resultados permiten concluir que quedaron establecidas las condiciones óptimas de trabajo para determinar la identidad antigénica por Dot Blot del polisacárido capsular de S. pneumoniae serotipo 19F presente en las vacunas conjugadas(AU)

Regulatory authorities recommend the use of NMR (Nuclear Magnetic Resonance) techniques or serological techniques to determine the identity of antigens on the conjugate vaccines. Due to the emergence of multivalent conjugate vaccines it has become necessary to use immunochemical techniques with the use of monoclonal antibodies (MAbs) in order to increase the sensitivity in determining the identity of such antigen in the conjugate vaccines. The aim of this study was to establish the optimal working conditions that would allow using Dot Blot technique to determine the identity of antigens in conjugate vaccines against Streptococcus pneumoniae serotype 19F. The incubation times, the possibility of using different reagents for blocking step were studied for this purpose; also the optimal concentrations of MAbs and active pharmaceutical ingredients (APIs), as well as the volumes of optimal application for APIs and vaccines. A monoclonal antibody against the capsular polysaccharide of S. pneumoniae serotype 19F (PsC 19F) was used. The samples used in this work, were samples of lots of APIs of monovalent conjugated PsC 19F and lots of Cuban heptavalent conjugate vaccine candidate against pneumococcus. The results showed that for the determination of the antigenic identity were optimal volumes of 10 µL of monovalent conjugate samples at 125 µg/mL and equal volume for heptavalent vaccines. For MAb was demonstrated that 1 µg/mL concentration of MAb against the PSC 19F and incubation times of 30 min at 37 °C were sufficient to successfully perform the determinations. In conclusion we can say that were established optimal working conditions to determine the antigenic identity, by Dot Blot, for the capsular polysaccharide of S. pneumoniae serotype 19F present in the APIs of monovalent conjugated and in the heptavalent conjugate vaccines(AU)

Determinación rápida de la identidad del polisacárido de Salmonella Typhi y toxoide diftérico en vacunas conjugadas / Rapid determination of the identity of Salmonella Typhi polysaccharide and diphtheria toxoid in conjugate vaccines

El polisacárido Vi (PsVi) de Salmonella Typhi es un antígeno T-independiente y ha demostrado ser protector en adultos jóvenes. Sin embargo, para aumentar la respuesta de anticuerpos y conferir propiedades T-dependientes al polisacárido, se ha conjugado a proteínas. Dentro de los controles exigidos por los organismos regulatorios para estas vacunas está la identidad antigénica de sus componentes y para eso se recomiendan el uso de técnicas de Resonancia Magnética Nuclear o técnicas serológicas. El objetivo del presente trabajo, fue establecer las condiciones óptimas de trabajo de un Dot Blot que permitiera determinar, rápidamente, la identidad de los antígenos en vacunas conjugadas contra S. Typhi. Para ello, se estudiaron los tiempos de incubación, las concentraciones óptimas de anticuerpo monoclonal (AcM) y del ingrediente farmacéutico activo (IFA), así como los volúmenes de aplicación óptimos para las IFAs y formulaciones vacunales, tanto para el PsVi como para el toxoide diftérico (TD). Los resultados mostraron que para la determinación de la identidad antigénica fueron suficientes 5 µL de muestras de los conjugados monovalentes en una dilución de 1/10 (vol/vol) e igual volumen para las formulaciones vacunales. Quedó demostrado que la concentración de 2,5 µg/mL para el AcM contra el PsVi y a 2 µg/mL para el AcM contra TD fueron suficientes para la determinación; mientras que los tiempos de incubación fueron ajustados a 15 min con incubación a 37 ºC. Como conclusión del trabajo se puede decir que quedaron establecidas las condiciones óptimas de trabajo para la determinación rápida de la identidad antigénica del PsVi y del TD presentes en IFA y formulaciones vacunales conjugadas(AU)

Vi polysaccharide from Salmonella Typhi is a T-independent antigen that has proven to be protective in young adults. However, it has been conjugated to proteins in order to confer T-dependent properties to the polysaccharide, and improving the antibody response. The regulatory agencies require knowing the identity of antigens included in vaccines. The Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy and serological techniques are recommended. The aim of this work was to establish the optimal working conditions of a Dot Blot that would allow to determine quickly the identity of the antigens in conjugate vaccines against S. Typhi. The incubation times, optimum concentrations of monoclonal antibodies (MAb) and active pharmaceutical ingredient (API), as well as optimum application volumes for APIs and vaccine formulations were studied for both, PsVi and diphtheria toxoid (DT). It was proven that 5 µL of samples of the monovalent conjugates were sufficient at a dilution of 1/10 (vol/vol) and an equal volume for the vaccine formulations. It was demonstrated that the concentration of 2.5 µg/mL for the MAb against PsVi and 2 µg/mL for the MAb against DT were suitable. The incubation times were adjusted to 15 min with incubation at 37 ºC. It was established a simple and rapid method for the specific identification of PsVi and DT present in API and conjugate vaccines(AU)

Acción adyuvante de esporas de Bacillus subtilis por vía mucosa / Activity adjuvant of Bacillus subtilis spores for mucosal route

Las esporas de Bacillus subtilis, generalmente reconocidas como seguras, han recibido una creciente atención en aplicaciones biotecnológicas en formulaciones vacunales, sobre todo como adyuvantes. Este trabajo presenta una revisión actualizada de la acción adyuvante de las esporas de B. subtilis y conjuntamente se expone nuestra experiencia por vía oral (o.r) e intranasal (i.n) como adyuvante frente antígenos modelos ovoalbúmina (Ova) y toxoide tetánico (TT). Se realizó una revisión documental sobre B. subtilis, adyuvante, vacuna y vía mucosal en MEDLINE a través de PubMed; también se revisaron las bases de datos SciELO y LILACS. Para la exploración de la capacidad adyuvante se trabajó con esporas de B. subtilis (cepa RG 4365). Se inmunizaron ratones Balb/c por vía mucosal con esporas coadministradas con los antígenos modelos, y se midió las respuesta de anticuerpos específicos en suero, saliva y heces por método de ELISA. La revisión realizada evidenció la existencia de varios trabajos que utilizan las esporas de B. subtilis por diferentes metodologías y vías de administración como adyuvante, siendo la expresión de antígenos recombinantes la más utilizada, así como la vía o.r entre la aplicación mucosa. En nuestro trabajo se obtuvo un aumento de la respuesta sérica de IgG, subclases IgG1 e IgG2a y de IgA específicos en saliva y heces en los grupos inmunizados con esporas coadministradas con Ova y con TT por ambas vías, significativamente superior a los grupos controles (p<0,05). Estos datos sugieren que las esporas son eficientes adyuvantes pues aumentan la respuesta inmune humoral sistémica y mucosal y resalta su potencial clínico en futuras vacunas mucosales(AU)

Bacillus subtilis spores generally considered safe, have received growing attention due to their potential biotechnological applications including vaccine formulations, particularly as vaccine adjuvants. In the present review we present the status of the adjuvanticity of the spore B. subtilis for mucosal route and our experience regarding its adjuvant activity induced against two model antigens, Tetanus Toxoid (TT) and ovalbumin (Ova) for oral (o.r) and intranasal (i.n) immunization. A document review on B. subtilis, adjuvant, vaccine and mucosal route was carried out in MEDLINE by PubMed, SciELO and LILACS databases. B. subtilis spores (RG 4365) were used for the exploration of the adjuvant activity. Balb/c mice were immunized by i.n and o.r route with TT or Ova combined with B. subtilis spores and specific antibody response in serum, saliva and fecal were measured by ELISA. This review showed the existence of several papers using B. subtilis spores as adjuvant by different methodologies and administration routes, being the expression of recombinant antigens and the the o.r route the most widely used. In our work we found an increase of seric response of IgG, subclass IgG1 and IgG2a and specific IgA in saliva and feces in groups immunized with spores coadministered with Ova and TT by both routes, which was significantly superior to control groups (p<0.05). These data suggest that spores are an efficient mucosal and systemic adjuvant for enhancing humoral immune responses and highlight their clinical potential for future mucosal vaccines(AU)

Dot Blot para determinar la identidad antigénica en vacunas conjugadas contra Streptococcus pneumoniae serotipo 19F / Dot Blot to determine the antigenic identity in conjugated vaccines against Streptococcus pneumoniae serotype 19F

Las autoridades regulatorias recomiendan el uso de técnicas de Resonancia Magnética Nuclear o técnicas serológicas para la determinación de la identidad de los antígenos presentes en las vacunas conjugadas. Con la aparición de las vacunas conjugadas multivalentes, se ha hecho necesario recurrir a técnicas inmunoquímicas con la utilización de anticuerpos monoclonales para aumentar la sensibilidad en la determinación de la identidad de los antígenos en dichas vacunas conjugadas. El objetivo del presente trabajo fue establecer las condiciones óptimas de trabajo que permitieran utilizar la técnica del Dot Blot para determinar la identidad de los antígenos en vacunas conjugadas de Streptococcus pneumoniae serotipo 19F. Para ello se estudiaron los tiempos de incubación, la influencia del reactivo en la solución de bloqueo; también las concentraciones óptimas del anticuerpo monoclonal y de los ingredientes farmacéuticos activos, así como los volúmenes de aplicación óptimos para estos y vacunas. Se utilizó un anticuerpo monoclonal contra el polisacárido capsular del serotipo 19F de neumococo. Las muestras empleadas en este trabajo fueron lotes de ingredientes farmacéuticos activos de conjugados de polisacárido capsular 19F y lotes de un candidato vacunal cubano conjugado heptavalente contra neumococos. Los resultados mostraron que para la determinación de la identidad antigénica fueron suficientes 10 µL de muestras de los principios activos a una concentración de 125 µg/mL e igual volumen para las vacunas heptavalentes. Quedó demostrado que una concentración de 1 µg/mL para el anticuerpo monoclonal y tiempos de incubación de 30 min a 37 °C fueron suficientes para la determinación. Estos resultados permiten concluir que quedaron establecidas las condiciones óptimas de trabajo para determinar la identidad antigénica por Dot Blot del polisacárido capsular de S. pneumoniae serotipo 19F presente en las vacunas conjugadas(AU)

Regulatory authorities recommend the use of NMR (Nuclear Magnetic Resonance) techniques or serological techniques to determine the identity of antigens on the conjugate vaccines. Due to the emergence of multivalent conjugate vaccines it has become necessary to use immunochemical techniques with the use of monoclonal antibodies (MAbs) in order to increase the sensitivity in determining the identity of such antigen in the conjugate vaccines. The aim of this study was to establish the optimal working conditions that would allow using Dot Blot technique to determine the identity of antigens in conjugate vaccines against Streptococcus pneumoniae serotype 19F. The incubation times, the possibility of using different reagents for blocking step were studied for this purpose; also the optimal concentrations of MAbs and active pharmaceutical ingredients (APIs), as well as the volumes of optimal application for APIs and vaccines. A monoclonal antibody against the capsular polysaccharide of S. pneumoniae serotype 19F (PsC 19F) was used. The samples used in this work, were samples of lots of APIs of monovalent conjugated PsC 19F and lots of Cuban heptavalent conjugate vaccine candidate against pneumococcus. The results showed that for the determination of the antigenic identity were optimal volumes of 10 µL of monovalent conjugate samples at 125 µg/mL and equal volume for heptavalent vaccines. For MAb was demonstrated that 1 µg/mL concentration of MAb against the PSC 19F and incubation times of 30 min at 37 °C were sufficient to successfully perform the determinations. In conclusion we can say that were established optimal working conditions to determine the antigenic identity, by Dot Blot, for the capsular polysaccharide of S. pneumoniae serotype 19F present in the APIs of monovalent conjugated and in the heptavalent conjugate vaccines(AU)

Mucosal and systemic immune responses induced by a single time vaccination strategy in mice.

Vaccination is considered by the World Health Organization as the most cost-effective strategy for controlling infectious diseases. In spite of great successes with vaccines, many infectious diseases are still leading killers, because of the inadequate coverage of many vaccines. Several factors have been responsible: number of doses, high vaccine reactogenicity, vaccine costs, vaccination policy, among others. Contradictorily, few vaccines are of single dose and even less of mucosal administration. However, more common infections occur via mucosa, where secretory immunoglobulin A plays an essential role. As an alternative, we proposed a novel protocol of vaccination called Single Time Vaccination Strategy (SinTimVaS) by immunizing 2 priming doses at the same time: one by mucosal route and the other by parenteral route. Here, the mucosal and systemic responses induced by Finlay adjuvants (AF Proteoliposome 1 and AF Cochleate 1) implementing SinTimVaS in BALB/c mice were evaluated. One intranasal dose of AF Cochleate 1 and an intramuscular dose of AF Proteoliposome 1 adsorbed onto aluminum hydroxide, with bovine serum albumin or tetanus toxoid as model antigens, administrated at the same time, induced potent specific mucosal and systemic immune responses. Also, we demonstrated that SinTimVaS using other mucosal routes like oral and sublingual, in combination with the subcutaneous route elicits immune responses. SinTimVaS, as a new immunization strategy, could increase vaccination coverage and reduce time-cost vaccines campaigns, adding the benefits of immune response in mucosa.

Obtención de un diagnosticador rápido de cólera, basado en partículas de látex acopladas a un anticuerpo monoclonal contra lipopolisacárido de Vibrio cholerae O1 / Obtaining of a rapid diagnostic test for Cholera, based on latex particles coupled with a monoclonal antibody against Vibrio cholerae O1 lipopolysaccharide

El cólera es una enfermedad infecto-contagiosa intestinal aguda, causada por la ingestión de alimentos o agua contaminada con los serotipos O1 y O139 de la bacteria Vibrio cholerae. Se caracteriza por diarrea secretora abundante que llevan rápidamente a la deshidratación. Sin tratamiento adecuado produce la muerte en horas, por lo que el diagnostico precoz es muy importante sobre todo porque al inicio es difícil diferenciarla de otras enfermedades diarreicas agudas. La prueba diagnóstico de oro es el coprocultivo; sin embargo, no garantiza una detección rápida de la enfermedad. Recientemente se desarrollaron ensayos rápidos, se basan en tiras reactivas y aglutinación con partículas de látex, muy efectivos, pero difíciles de adquirir por sus altos precios. El objetivo de este trabajo fue obtener un diagnosticador rápido basado en partículas de látex acopladas a un anticuerpo monoclonal (AcM) contra el lipopolisacárido de V. cholerae O1, el cual se obtuvo en el Instituto Finlay. Se usaron partículas de látex de 0,8 µm en una suspensión al 10 por ciento a las que se acopló durante 2 h a 37°C el AcM a 0,25 mg/mL. Se evaluó la sensibilidad, especificidad y el desempeño en 84 muestras de heces de pacientes con diagnóstico presuntivo de cólera. El diagnosticador que se obtuvo no evidenció reactividad cruzada frente a cepas no-O1, ni contra otros enteropatógenos. El diagnosticador látex presentó valores de sensibilidad, especificidad y eficacia de 97,87; 97,29 y 97,6 por ciento respectivamente, muy similares al diagnosticador comercial CTK-Biotech. El diagnosticador látex que se obtuvo se puede utilizar en el diagnóstico rápido de la enfermedad(AU)

Cholera is an acute contagious intestinal disease caused by ingestion of food or water contaminated with O1 and O139 serotypes of the bacterium Vibrio cholerae . Cholera is characterized by abundant secretory diarrhea leading to dehydration. Death occurs within hours without treatment, so early diagnosis is very important, especially at the beginning of the disease, because it is difficult to differentiate from other acute diarrheal diseases. The diagnostic golden test is the stool culture; however, it does not guarantee a rapid detection of the disease. Rapid tests have been recently developed; they are based on test strips and agglutination with latex particles, which are very effective, but difficult to acquire for their high prices. The objective of this research was to obtain a quick assay based on latex particles coupled with a monoclonal antibody (mAb) against V. cholerae O1 lipopolysaccharide obtained in Finlay Institute. Latex particles of 0.8 µm were used in a 10 percent suspension, and they were coupled to the mAb (0.25 mg/ml) for 2 hours at 37°C. The sensitivity, specificity and performance were evaluated in 84 stool samples from patients with presumptive diagnosis of cholera. The diagnostic test obtained showed no cross-reactivity against no-O1 strains and other enteropathogens. Latex diagnostic test showed values of sensitivity, specificity and efficacy of 97.87; 97.29 and 97.6 percent respectively, very similar to the commercial diagnostic test CTK-Biotech. The latex reagent obtained can be used in the rapid diagnosis of the disease(AU)

Evaluación de los Anticuerpos Monoclonales anti-polisacárido capsular de Neisseria meningitidis serogrupos A, C, Y, W y X para su uso en los ensayos de identidad / Evaluation of monoclonal antibodies to the capsular polysaccharide of Neisseria meningitidis serogroups A, C, Y, W and X to be used in the identity assays

Los serogrupos A, B, C, W, Y y X de Neisseria meningitidis (Nm) son los principales responsables de la enfermedad meningocóccica y contra ellos va dirigido actualmente el desarrollo de vacunas para la prevención de la enfermedad. El Instituto Finlay se encuentra desarrollando vacunas antimeningocóccicas polisacarídicas contra los serogrupos A, C, W, Y y X. En el desarrollo de estas vacunas, el ensayo de identidad constituye un requisito obligatorio para la liberación final del producto. Este ensayo se realiza mediante la técnica Dot Blot, utilizando anticuerpos policlonales (AcP) comerciales; sin embargo, el Instituto Finlay cuenta en este momento con una plataforma de Anticuerpos Monoclonales (AcM) contra los cinco polisacáridos (PsC) de Nm. El objetivo del trabajo fue evaluar la sensibilidad y especificidad de estos AcM para su uso en los ensayos de identidad de las vacunas antimeningocócicas polisacarídicas, con vista a sustituir los AcP comerciales empleados hasta el momento. La sensibilidad de los AcM se evaluó frente al PsC homólogo y la especificidad frente al resto de los PsC de Nm. Se realizó el ensayo de identidad por Dot Blot a cuatro vacunas polisacarídicas multivalentes, usando los AcM comparativamente con los AcP. Todos los AcM evaluados mostraron una alta sensibilidad y especificidad, no encontrándose reactividad cruzada y siendo capaces de identificar en las formulaciones vacunales multivalentes la presencia del PsC homólogo. Concluimos que los AcM obtenidos en nuestro instituto pueden ser usados para los ensayos de identidad de las vacunas(AU)

Neisseria meningitidis serogroups A, B, C, W, Y and X are the main responsible of meningococcal disease. Vaccines are necessary to prevent this disease. The Finlay Institute is developing polysaccharide vaccines against serogroups A, C, W, Y and X. In the development of vaccines, the identity assay is a mandatory requirement for final product release. This test is performed by Dot Blot technique using commercial polyclonal antibodies (PAb). However, the Finlay Institute has monoclonal antibodies (mAbs) against capsular polysaccharides from N. meningitidis (CPs). The objective of this work was to use these mAbs in identity tests to replace commercial PAb. The specificity of the mAbs, the cross-reactivity with other CPs and the identity of the CPs present in four multivalent polysaccharide vaccines, were evaluated. All tested mAbs showed high specificity, and no cross-reactivity was found. Also all mAbs were able to identify the presence of homologous PsC in multivalent vaccine formulations. We conclude that the mAbs obtained in our institution can be used for identity assays of vaccines(AU)